MTT/噻唑藍(lán) 細(xì)胞增殖 細(xì)胞活性 藥物篩選

數(shù)量(瓶) 價格
10000 288.00元/瓶
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上海炎熙生物科技有限公司

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  • 家家通積分:734分
詳細(xì)參數(shù)
品牌炎熙生物產(chǎn)品名稱MTT,噻唑藍(lán)
用途類別細(xì)胞增殖細(xì)胞活性藥物篩選執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)
安全性及措施請穿實驗服并戴一次性手套操作包裝規(guī)格1克
貯存方法4度避光產(chǎn)地上海

產(chǎn)品詳情

MTT/噻唑藍(lán) 細(xì)胞增殖 細(xì)胞活性 藥物篩選

 簡要介紹:

MTT商品名噻唑藍(lán),是一種黃顏色的染料。MTT主要用途:

1.藥物(或其他處理方式)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞活性的測定;

2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。

MTT廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的藥物篩選、細(xì)胞活性試驗以及腫瘤敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟實惠。

 

貨號:CT-MTT-1

包裝量:1.0克MTT粉末

儲存:+4°C,避光

 

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學(xué)名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍(lán),是一種黃顏色的染料。在水中的溶解度為20 mM。

 

技術(shù)資料:

CAS No:298-93-1

分子量:414.32

分子式:C18H16N5SBr

純度:>98%

 

MTT主要有兩個用途:

1.藥物(或其他處理方式)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞活性的測定;

2.細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測定。

 

MTT實驗的原理:

細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臢(Formazan),并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞不能進行這個反應(yīng)。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臢,用酶標(biāo)儀在570 nm波長處(490 nm -570 nm之間都可以)測定其光吸收值,在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值)來判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越?。?。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的藥物篩選、細(xì)胞活性試驗以及腫瘤敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟實惠。

 

MTT實驗方法(供參考)

 

一、MTT的配制

通常配制的MTT濃度為5 mg/ml??梢苑Q取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸鹽緩沖液(PBS)或無酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22 μm濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌,放4℃ 避光保存,兩周內(nèi)用完。也可分裝后避光保存在-20℃長期保存,并避免反復(fù)凍融。在配制和保存的過程中,容器最好用鋁箔紙包住。

 

二、實驗步驟

A、貼壁細(xì)胞

1、收集對數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,向96孔板每孔加入100ul鋪板,調(diào)節(jié)待測細(xì)胞密度使每孔含1000-10000個細(xì)胞,邊緣孔用無菌水或PBS填充。

2、在5%CO2,37℃條件下孵育。原則上,細(xì)胞貼壁后即可加藥,或兩小時,或半天時間,或過夜。一般常在前一天下午鋪板,次日上午加藥。一般設(shè)5-7個藥物梯度,每孔100ul,一般設(shè)3個復(fù)孔即可,復(fù)孔越多結(jié)果越準(zhǔn)確。同時設(shè)置調(diào)零孔(僅含培養(yǎng)基和藥物溶解介質(zhì))和對照孔(僅含細(xì)胞和藥物溶解介質(zhì))。

3、置于5%CO2,37℃條件下,孵育時間根據(jù)藥物的作用特點來決定,一般24-72小時,中途可在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀況。

4、每孔加入20ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5% MTT),37℃繼續(xù)培養(yǎng)3-4小時。若藥物能夠與MTT反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS洗2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。

5、終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

6、每孔加入150 ul DMSO,置搖床上低速振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分溶解。在570nm(可用630nm校準(zhǔn))測量各孔的吸光值。

 

B、懸浮細(xì)胞

1、收集對數(shù)期細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1E6/ml,依次將①細(xì)胞懸液50ul(即5E4cell/孔),②待檢測藥物50ul,共100ul加入到96孔板(邊緣孔用無菌水或PBS填充)。一般設(shè)5-7個藥物梯度,一般設(shè)3個復(fù)孔即可,復(fù)孔越多結(jié)果越準(zhǔn)確。同時設(shè)置調(diào)零孔(僅含培養(yǎng)基和藥物溶解介質(zhì))和對照孔(僅含細(xì)胞和藥物溶解介質(zhì))。

2、置于5% CO2,37 ℃條件下,孵育時間根據(jù)藥物的作用特點來決定,一般24-72小時,中途可在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀況。

3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),37℃繼續(xù)培養(yǎng)3-4 h。

4、離心(1000轉(zhuǎn)x10 min),小心吸掉上清,每孔加入150 μl DMSO,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在570 nm(可用630 nm校準(zhǔn))測量各孔的吸光值。

 

注意事項

1、MTT法只能用來檢測細(xì)胞相對數(shù)和相對活力,但不能測定細(xì)胞絕對數(shù)。在用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果的時候,為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確,MTT 吸光值要控制在儀器的線性讀取范圍內(nèi)。

2、MTT最好現(xiàn)用現(xiàn)配,配制成5 mg/ml無菌過濾后,在4 ℃避光保存兩周內(nèi)有效,或在-20℃長期保存,避免反復(fù)凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光,以免分解。

3、保存的MTT溶液需要無菌,MTT對菌很敏感;往96孔板加時不避光也沒有關(guān)系,畢竟時間較短,不放心的話可以把操作臺上的照明燈關(guān)掉。

4、配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,可用60 ℃水浴助溶。

5、MTT的缺點:由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲臢產(chǎn)物不溶于水,需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響,而且溶解甲臢的有機溶劑對實驗者也有損害。

6、MTT有致癌性,用的時候小心,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,最好戴透明的薄膜PE手套。

7、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用。

 

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